เอนไซม์ในข้อใดต่อไปนี้จำเป็นต่อการเพิ่มจำนวนของ DNA แบบ PCR

ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (Polymerase chain reaction ; PCR)
  
ปฏิกิริยาลูกโซ่พอลิเมอเรส (อังกฤษ: Polymerase chain reaction; ตัวย่อ: PCR) เป็นกระบวนการสังเคราะห์ชิ้นส่วนดีเอ็นเอในหลอดทดลอง ซึ่งกระบวนการนี้เลียนแบบกระบวนการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในสิ่งมีชีวิต ผู้คิดค้นเทคนิคพีซีอาร์ คือ Kary Mullis พีซีอาร์ประกอบไปด้วยขั้นตอนต่าง ๆ ดังต่อไปนี้

การแยกสายดีเอ็นเอเกลียวคู่ออกจากกัน (Denaturation) ใช้อุณหภูมิ ประมาณ 94 องศาเซลเซียส เมื่อเริ่มต้นดีเอ็นเอแม่แบบ จะอยู่ในลักษณะที่เป็นเกลียวคู่ เมื่อเพิ่มอุณหภูมิถึงประมาณ 94 องศาเซลเซียส จะทำให้พันธะไฮโดรเจนระหว่างคู่เบสของดีเอ็นเอถูกทำลาย ทำให้เส้นดีเอ็นเอแยกออกจากกัน โดยขั้นตอนนี้จะแตกต่างจากการสังเคราะห์ดีเอ็นเอในธรรมชาติ คือ ในสิ่งมีชีวิติจะมีเอนไซม์เฮลิเคส (Helicase) ช่วยในการแยกสายและคลายเกลียวดีเอ็นเอ
การจับของไพร์เมอร์กับดีเอ็นเอแม่แบบ (Annealing) ใช้อุณหภูมิประมาณ 40-62 องศาเซลเซียส เมื่อแยกสายดีเอ็นเอออกจากกันแล้ว จะลดอุณหภูมิลงเหลือ 40-62 องศาเซลเซียส เพื่อให้ดีเอ็นเอสังเคราะห์ขนาดสั้นประมาณ 15-25 เบส ที่เรียกว่า ไพร์เมอร์ (Primer) เข้ามาจับบริเวณที่มีลำดับเบสคู่สมกัน ในการสังเคราะห์ดีเอ็นเอ ไม่สามารถที่จะเริ่มจากศูนย์ได้เนื่องจากเอ็นไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอร์เรส (DNA polymerase) ต้องการปลาย-OH ทางด้าน 3'เพื่อนำ นิวคลีโอไทด์ตัวต่อมาต่อ ซึ่งในสิ่งมีชีวิตจะมีเอ็นไซม์ที่มีชื่อว่า ไพรเมส (Primase) เป็นตัวสร้างอาร์เอ็นเอไพรเมอร์ขึ้น
การสังเคราะห์ดีเอ็นเอสายใหม่ต่อจากไพรเมอร์ (Extension) ใช้อุณหภูมิ ประมาณ 68-72 องศาเซลเซียส ในขั้นตอนนี้จะเป็นการสร้างสายดีเอ็นเอต่อจากไพร์เมอร์ โดยอุณหภูมิที่ใช้จะพอเหมาะกับ การทำงานของ Taq DNA polymerase

องค์ประกอบที่สำคัญในการทำ PCR ได้แก่

-ดีเอ็นเอแม่แบบ (Template DNA)
-ไพรเมอร์ Primer
-เอ็นไซม์DNA Polymerase ชนิดทนความร้อน (Taq DNA polymerase)
-Deoxy nucleotide triphosphate(dNTP)
-บัฟเฟอร์สำหรับเอ็นไซม์ดีเอ็นเอพอลิเมอเรส (PCR Buffer)
-แมกนีเซียมคลอไรด์(MgCl2)
-เครื่องมือที่สำคัญในการทำพีซีอาร์ได้แก่ Thermal cycler หรือ PCR machine

ข้อมูลจากวิกิพีเดีย สารานุกรมเสรี

 (Ref://www.youtube.com/watch?v=iQsu3Kz9NYo)

�Է����ʵ�� ������ʵ�� ���ԡ�� ��� ����Է�� >>

෤�Ԥ�ҧͳ٪���Է��

෤�Ԥ��鹰ҹ�ҧͳ٪���Է��
Electrophoresis
Paper electrophoresis ��� Gel electrophoresis
�������͹���� DNA �ҡ�����ŧ仺���д�� (DNA Blotting)
DNA Probe ��� Hybridization
Restriction Endonuclease
��������ӹǹ DNA ���Ը� PCR (Polymerase chain reaction)
෤�Ԥ DNA cloning
����������ͪ����ǹ DNA �Ѻ cloning vector ��������� recombinant DNA
��ù� recombinant DNA ������ host cell (transformation)
��äѴ���͡ clone ����� gene ����ͧ���
෤�Ԥ㹡�õ�Ǩ�ͺ DNA (DNA identification)
෤�Ԥ㹡���� DNA sequence
෤�Ԥ�ҧͳ٪���Է�ҷ�����ż�Ե�����㹷ҧ���ᾷ��
˹ѧ�����ҧ�ԧ

���Ըա�������ӹǹ�ͧ DNA ��ǹ����ͧ��èҡ DNA ������������ʡѴ���� �ش������鹢ͧ��÷� PCR ��� ��ǹ����ͧ DNA �������ǹ�ͧ DNA �����ҵ�ͧ��������ӹǹ���� �� oligonucleotide primer 1 ��� ������ӴѺ�� complementary �ѹ�Ѻ�ӴѺ�ʢͧ���� 2 ��ҧ�ͧ DNA ��ǹ�����ҵ�ͧ��������ӹǹ (�ѧ��� ��Ҩ��繷��е�ͧ��Һ�ӴѺ�ʺҧ��ǹ�ͧ DNA ���������� ���� DNA ��ǹ�����ҵ�ͧ��������ӹǹ ���ͷ����Ҩ�����ö�����ӹǹ DNA ��ǹ���� ��)

�Ըա�÷� PCR ��Сͺ仴���

1. denaturation �������� double stranded DNA �¡����͡���� single stranded ���������͹����س����� 94°C
2. annealing ���¶֧��������������ҧ primer �Ѻ�ӴѺ�ʷ�� complementary �ѹ
3. polymerization ���� extension �繡�õ����� primer ���͹��� DNA polymerase ��㹡�ù�� ��Ҩ��� DNA polymerase ��Դ����ɷ�����¡��� Taq (Tack) polymerase �� DNA polymerase ���ʡѴ�Ҩҡ bacteria Thermus aquaticus ����դس���ѵԷ���ͤ�����͹�� (bacteria ��ǹ��������������dz��Ӿ���͹)
4. �ӫ�Өҡ ��� 1 �֧ ��� 3 ��� heat denaturation, annealing of primers ��� primer extension �ա����� �ͺ �·���仹����ӻ���ҳ 25-30 �ͺ

����������º��С��˹�觢ͧ�Ը� PCR ��� Taq polymerase ���������դس���ѵ� proof reading �ѧ����Ҩ���դ����Դ��Ҵ㹡�ù��ʷ��١��ͧ�ҵ������ DNA ����� ��������ʷ��Դ仨ҡ DNA ��Ẻ �ա��С��˹�� PCR ���Ըշ���ǵ�͡�û����͹�ͧ DNA ��� DNA ��ǵ鹶١�����͹���� DNA ��蹫�� primer ����ö�Ѻ�� ����ա�������ӹǹ��ǹ�ͧ DNA ���� ������ �Ѻ��������ӹǹ DNA ��ǹ�����ҵ�ͧ���

���ա�û���ء�������Ըա����мż�Ե�ҡ PCR ������´�ҹ �����駡�������ӹǹ�ͧ��ǹ�ͧ DNA ���͹�价� DNA cloning ���͡�������ӹǹ��ǹ�ͧ DNA ����ͧ��èҡ genomic DNA ������价� sequencing ����֧������Ը� PCR 㹡���ԹԨ����ä

���Ը� PCR ��� �ӹǹ�ͧ DNA ��ǹ����ͧ��è��������Ẻ�âҤ�Ե ����Ǥ�� ���������鹨ҡ DNA 1 ���š�� �ͺ���˹�觢ͧ PCR ���� DNA 2 ���š�� �ͺ����ͧ���� 4 ���š�� �ͺ������ ���� 8 ���š�� ���ҧ���������� �ͺ����Ժ���� 1,026 ���š�� �ͺ�������Ժ���� 1,048,576 ���š�� �Ըչ�����Ըշ��������, �Ǵ���� �����ͺ���������ҹ (�ٻ��� 14.6) ����ҵ�ͧ���ҧ��ǹ�ͧ�ӴѺ�ʢͧ DNA ������ʹ������繻���ª��㹡���͡Ẻ����ѧ������ primer PCR ����ö�����ԹԨ����ä�� �� �� PCR 㹡�õ�Ǩ��Ấ������ ���� ����� �� HIV (human immunodeficiency virus) ��������˵آͧ�ä AIDS Human cytomegalovirus ��� hepatitis B virus PCR �ѧ����ö�����㹡���ԹԨ����ä�ҧ�ѹ�ء��� ��੾�з�����õ�Ǩ�ͺ single-copy sequence � DNA �ͧ�����������¢���ҡ

��û���ء���� PCR �����ʹ��ա���ҧ˹�觤�� �ancient DNA analysis� ��� ����� PCR �����ӹǹ DNA �ͧ�ҡ�ͧ����ժ��Ե������������������;ѹ�������� �� DNA �ҡ������ �ҡ�ҡ��ŧ���͹����֡�Ҥ鹤��Ҵ�ҹ���Ѳ�ҡ�� �繵�