องค์ประกอบที่จำเป็นต้องใช้ในการทำเทคนิค PCR คือข้อใด

                    ดีเอ็นเอที่เกิดจากเทคนิคนี้ในหลอดทลอง มองไม่เห็นด้วยตาเปล่า  ดังนั้นเพื่อตรวจหาดีเอ็นเอผลผลิต ต้องนำตัวอย่างที่ทำพีซีอาร์มแยกหาดีเอ็นเอโดยใช้เทคนิคที่เรียกว่าอะกาโรสเจลอิเล็กโตรโฟริสิส (Agarose gel electrophoresis) ซึ่งเป็นการแยกดีเอ็นเอด้วยกระแสไฟฟ้าบนแผ่นวุ้น (Agarose gel) โดยระยะทางที่ดีเอ็นเอเคลื่อนที่ไปได้ขึ้นกับขนาดของดีเอ็นเอและกระแสไฟฟ้าที่ใช้ ดีเอ็นเอที่แยกโดยวิธีนี้ มองเห็นได้เมื่อย้อมด้วยสีพิเศษ ซึ่งเรืองแสงภายใต้แสงอุลตร้าไวโอเลต 

เครื่องเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม เป็นเครื่องมือวิทยาศาสตร์ที่มีในห้องปฏิบัติการที่ทำงานเกี่ยวข้องกับ DNA โดยเป็นเครื่องมือที่ใช้ประกอบกับเทคนิค PCR ในการเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นในหลอดทดลอง การรู้ถึงหลักการของเครื่องมือ วิธีการใช้งานอย่างถูกต้อง จะทำให้ผลการทดลองหรืองานวิจัยนั้นมีความน่าเชื่อถือ

เครื่องเพิ่มปริมาณสารพันธุกรรม เป็นเครื่องมือวิทยาศาสตร์ที่มีในห้องปฏิบัติการที่ทำงานเกี่ยวข้องกับ DNA ลักษณะของเครื่องเหมือนหม้อหุงข้าว เมื่อเปิดฝาออกภายในมีหลุมสำหรับใส่ตัวอย่าง ขนาด 0.2 ml จำนวน 48-96 หลุม (ตามคุณสมบัติของแต่ละเครื่อง) เครื่องนี้มีความสามารถในการปรับเปลี่ยนอุณหภูมิร้อนและเย็น และในแต่ละช่วงอุณหภูมินั้นสามารถตั้งเวลาได้ การทำงานจะเปลี่ยนอุณหภูมิ ระยะเวลา ตามโปรแกรมที่ตั้งไว้ หมุนเวียนกันไปนับเป็นจำนวนรอบ โดยในช่วงอุณหภูมิและระยะเวลาที่แตกต่างกันจะส่งผลต่อตัวอย่าง DNA ทำให้เกิดการเปลี่ยนแปลงขึ้นในหลายลักษณะ เทคนิคที่ใช้ในการเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นในหลอดทดลอง เรียกว่าเทคนิคพีซีอาร์ หรือ polymerase chain reaction เทคนิคนี้จะเพิ่มปริมาณ DNA ขึ้นโดยอาศัยหลักการการจำลองตัวเอง ในธรรมชาติ DNA จะอยู่เป็นสายคู่บิดเกลียววนขวา ประกอบด้วยเบส A T C และ G การเพิ่มปริมาณ DNA ในหลอดทดลองจะมี 3 ขั้นตอนคือ

1)      Denaturation เป็นการแยกสายดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบจากสภาพที่เป็นเส้นคู่ให้เป็นเส้นเดี่ยวโดยใช้อุณหภูมิในช่วง 92-95 องศาเซลเซียส

2)      Annealing เป็นขั้นตอนที่ลดอุณหภูมิลงอยู่ในช่วง 50-60 องศาเซลเซียส และใช้ไพรเมอร์ซึ่งเป็นดีเอ็นเอสายสั้น ๆ (ประกอบด้วยนิวคลีโอไทด์จำนวน 17-24 เบส) ที่มีลำดับเบสเป็นเข้าคู่กับสายดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบจับคู่กัน

3)      Extension เป็นขั้นตอนการสร้างดีเอ็นเอสายใหม่โดยสังเคราะห์ต่อจากส่วนปลายของไพรเมอร์ (ที่ใส่เข้าไปในขั้นที่สอง) ตามข้อมูลบนดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบแต่ละสายโดยอาศัยการทำงานของเอ็นไซม์ดีเอ็นเอโพลิเมอร์เรส (DNA polymerase) ซึ่งเอนไซม์นี้ทำงานได้ดีที่สุดที่อุณหภูมิ 72-75 องศาเซลเซียส

การทำ PCR ขั้นตอนที่ 1 ถึง 3 นับเป็นจำนวน 1 รอบ ให้ผลผลิตเป็นดีเอ็นเอสายคู่ที่มีลำดับเบสเป็นคู่สมกับดีเอ็นเอที่เป็นต้นแบบ เพิ่มขึ้นเป็นสองเท่า และเมื่อทำ PCR ขั้นตอนที่ 1 ถึง 3 หมุนเวียนไปอีกหลาย ๆ รอบ ปริมาณดีเอ็นเอจะเพิ่มขึ้นได้หลายเท่าทวีคูณ กล่าวคือปริมาณ DNA จะเพิ่มตามจำนวนรอบในการทำ PCR โดยปริมาณ DNA จะเท่า 2n เมื่อ n เท่ากับจำนวนรอบ

เทคนิค PCR นี้สามารนำไปใช้ประโยชน์ในการวิจัยด้านต่างๆ เช่นทางการแพทย์ ใช้ในการวินิจฉัยโรคต่าง ๆ ทั้งโรคติดเชื้อและโรคจากพันธุกรรม ได้แก่ การตรวจหาเชื้อไวรัสหรือแบคทีเรียที่เป็นสาเหตุของโรค ทำให้การวินิจฉัยโรคเพื่อป้องกันและรักษาเป็นไปอย่างมีประสิทธิภาพมากยิ่งขึ้น ทางการเกษตร มีประโยชน์ต่อการตรวจวินิจฉัยโรคพืช การตรวจสอบสายพันธุ์พืช นอกจากนี้แล้วเทคนิคพีซีอาร์ ยังช่วยให้เข้าใจพันธุกรรมของเชื้อโรคพืช ตลอดจนการนำไปใช้ในการป้องกันกำจัดโรคพืชที่เกิดจากเชื้อรา แบคทีเรีย และไวรัส หรือเชื้อสาเหตุโรคอื่น ๆ

෤�Ԥ PCR 㹡�������ӹǹ DNA ����ԹԨ����ä�ҧ��Դ���������ѧ�������ѹ������ ������� ���� Deoxyribonucleic (DNA) ������ѹ��������˹������Ǻ�����������ʹ�ѡɳ���ҧ� �ͧ��������Ե �������������Сͺ����˹�����������ҹ������¡��� ���Ǥ����䷴�� �ѹ���ش�ͧ���š�����࿵ ������ྐྵ�� �����������������ѵ�����ҧ���� ��ʔ 1 ��� ������������� 4 ��Դ��� adenine (A) , guanine (G) , cytosine (C) , thymine (T)�ѡɳ��ç���ҧ�ͧ���������Сͺ����ҡ����ش��Ǥ����䷴� 2 ���������ѹ��������ѹ���ѡɳ��������������ѹ����¹ ������������§�������������������� ���������˹������ִ�Ѻ�����ҧ�������ͧ ��л�ҡ���������ǹ������� A ���Ѻ������ҧ�ѹ�СѺ�� T �����ǹ������� G ���Ѻ����� C �������Ѻ����ѹ������¡������������ (�ѧ�ʴ���Ҿ��� 1) ���������ǹ����������������ͧ�������������ͧ ��չ� (gene) �������ǹ�����è�����������Ѻ������ҧ�õչ��Դ���Դ˹�� ���չ�����ҧ�ѹ���������˹�����������������§���Ѻ�ͧ��������ѹᵡ��ҧ�ѹ�

��������� ����ö�������������ѹ��������

��� �.�. 2513 ������������������������ҧ��Դ������ѹ����������������� RNA ���� Ribonucleic acid) ��������������͡�����ҡ���������������������������������ӹǹ���������������ҹ�� ������ҧ��������������ѹ����������������� ���� ����������ͪ������������˵��ͧ�ä�ʹ��������������������١�͡�������ҡ������������������ʹ�������ҧ�õչ����������ʹ�����ҧ�ѹ�������͡�����ѡɳ�����͡�ͧ��������Ե��������� ��Сͺ������Ǥ����䷴�������¡Ѻ������� ��������ᵡ��ҧ���ǹ�ͧ������ྐྵ�ʫ������������������ deoxyribose ��ǹ��������������Դ ribose ������������������������Сͺ������ 4 ��Դ���ѹ ������ 3 ��Դ�������͹�Ѻ������� ��� A, G, C ����������ҧ�Ѻ���������� uracil (U) ��� u ���Ѻ���Ѻ�� A (᷹�� T ��������)

������

��� DNA ������������ѹ�������ͧ��������Ե ������Ҵ���ᵡ��ҧ�ѹ�ҡ��ó��ͧ����������Ҩ�ը��� (genome) �����������ѹ�������������� DNA ���� RNA ������ ����Ҩ������������������������������� (linear) ǧ��ǹ (circular) ����������¡�ѹ (segments) �����ҧ�ҡ�����ͧẤ�����������������Ե����٧ ��������õչ�����Ѻ�ѹ����Ѻ��� DNA ������ٻ��ҧ������Ѵ ������¡��������� (chromosome) (�Ҿ��� 2) ����Ấ������ ���������� ��Сͺ���� DNA �������������Դǧ��ǹ�Ѻ�������Ѻ�õչ������Դ ����������¡�����Ǥ����´� (nucleoid) ������������������������������������������Ե����٧ ��� DNA ��������ѡɳ�����Ѻ����Ѻ���⵹ (histone) ����õչ��Դ���� ��������ѹ���˴����ͧ��� DNA �����������ö��è�������ǹ���������ͧ������ �͡�ҡ������������ ���������Ե����٧�ѧ���չ����������ǹ�ͧ organelle ���� ����ת�����չ���������͹���� (mitochondria) �������þ��� (chloroplast) �ա��ǹ˹������

෤�Ԥ Polymerase Chain Reaction (PCR)

Polymerase Chain Reaction ���� (PCR) ��෤�Ԥ����Ѻ��������ҳ����������������ѡ��� DNA Replication ���������ѧ����������� ��� �� ������� �ҡ ���������Ẻ���ʹ���ͧ�������������ѹ�����������������������Դ�������ҹ��� ෤�Ԥ����Ѳ������������ �.�. 2528 �� Kary Mullis ��������������ѷ Cetus Corporation �ش���ͧ෤�Ԥ PCR ��� ����ö��������ҳ������� �����ҧ੾���������������͹������ҹ����������������� ���֧�Ѩ�غѹ���෤�Ԥ PCR ���Ѻ�����Ѻ��ا����Ѳ������� � ��ҹ����з�����Ѻ�������Ѻ�����෤���������Ӥѭ�ҡ����ҹ��ҹͳ�������š�� ����ö���������ª������駡Ѻ�ҹ�Ԩ���ҧ������š������ѹ�����ǡ��� �� �����������ҳ�չ (gene cloning) ��������������Ѻ���ͧ�չ (gene sequencing) ������ҧ �� ��� �� �Դ��� (DNA probe) �������Ԩ������ء�� �� ����֡������ʴ��͡�ͧ�չ�ҡ mRNA ������ҧ�չ�����ѹ��� (in vitro mutagenesis) �����������˹������ѹ������չ (point mutations and deletions) ����෤�Ԥ PCR 㹡�������ӹǹ DNA

�Ҿ��� 1 ͧ���Сͺ����ç���ҧ�ͧ DNA ��èѺ���ѹ�ͧ�ʤ�����ͧ��� DNA �ͧ��·�������ѡɳ�����Ǥ�� ��Ѻ��ȷҧ
(����� : Alberts ����, 1983)

�Ҿ��� 2 ��� DNA ����Ǥ��ѹ�Ѻ�õչ���˴�����������ҵչ������������������������
(����� : Freifelder, 1985)

��ѡ��âͧ PCR

����ѡ�������ҹ�����ѧ������������� ��������ҡ���������� �������Ẻ˹����������͹��� DNA poloymerase ������ѹ��������������Դ��ҡ������� �������֡�������������Ѻ�� �� PCR ����ö�ѧ��������������������� 2 ���������ѹ ����������� (primer) 1 ��� ��ԡ����� PCR �� 3 ����͹ �����ع���¹ ������ͧ�ѹ� ���������������������ͧ��������͹����á ���¡��� denaturing ������¡����� ��� �� �������Ẻ�ҡ��Ҿ����������� ������������������س������٧ 92-95o��������ͧ���¡��� annealing ������͹���Ŵ�س�����ŧ����Ѵ���������� ������� ��� �� ������ � (��Сͺ������Ǥ����䷴�ӹǹ 14-13 ��) ��������Ѻ ����������Ѻ�� ��� �� �������Ẻ�Ѻ����ѹ ����������س��������ǧ 37-60o ������� 3 ���¡��� extension ������͹����ѧ�������� ��� �� ����������ѧ����������ҡ��ǹ���� 5 �ͧ������� ������������������ �������Ẻ��������������������ҹ�ͧ����������������������� (DNA polymerase) ���������������ö���ҹ��������ش����س����� 72-75o � �͹������������������������������� �س���ѵ������������������ͧ��ԡ����� ��ʹ����������͹
�Ҿ��� 3 ��ѡ����������͹�����������ҳ������� ����෤�Ԥ PCR
(����� : PE applied Biosystems)�ҡ����͹��� 1-3 ����Ѻ���ӹǹ 1 �ͺ (one cycle) ���������Ե�����������������������Ѻ����������Ѻ��������������Ẻ����������ͧ��� ������Ѵ����Դ��ԡ������١���ҡ������ 1 �֧ 3 ��ع���¹��ա���� � �ͺ����������ҳ��������� �ҡ��� ����ҳ�����ԡ����� 20 �ͺ ����ö��������ҳ����������������������� 100,000 ���

����������������ͧ���ԡ����� PCR

���ͧ�ҡ����� PCR ��������ҧ���������� ����������ʹ���ͧ �֧��ͧ�����������������������������������ͧ �����������������ҧ���������������� �����������ͧ����ԡ����� PCR ���ѧ�������
  1.  Deoxynucleotides (dNTPs) ����Ǥ����䷴� �����˹�����������Ѻ����ѧ��������������������
  2.  DNA polymerase ���͹�������Ѻ�ѧ�������������������������ԡ���������������Ǥ����䷴�������ҡѺ�������
  3.  Primer ���������������������� � ��������Ѻ����������Ѻ��������������Ẻ�ͧ����ѧ������ ������ PCR �֧��ͧ��Һ���Ѻ���ͧ������������ͧ����������ӹǹ �������������ҧ����������
  4.  PCR buffer ��������������Ǻ���������ͧ�������ԡ��������������� �� pH ���������ҧ � �������ͧ��͹������������� (Mg++) ��������
  5.  Template ������������Ẻ�����չ��ǹ�����ͧ�����������ҳ ������������ҧ������� �����ͧ���������Ǩ��������������
�������������ǹ����ͧ��ԡ����� PCR ������ѹ������ʹ���ͧ�������ҵ���� 20-100 �����Ե� ���������ʹ��ǹ���������������ͧ�Ǻ����س�����������¡��� DNA thermal cycler (�������¡�������ͧ Pcr) �����Ѻ�س��������������������˹� ���Դ����ѧ��������������������������ʹ ������Դ��ԡ��������ú�ͺ���������������˹���������Ե������� ��Ҵ�����ͧ������ӹǹ�ҡ

����ͧ��������ҳ������� (PCR machine)

����ͧ Thermal cycler ���� PCR machine ������ͧ������������� PCR �������ͧ�������������Ẻ��������к���鹡Ѻ����͡Ẻ�������Դ���ͧ����ѷ �����Ե ����Ӥѭ�����ͧ����ö��Ѻ����¹�س�������������͹������������������ҹ��ع���¹�ѹ���� � �ͺ����������������ҹ������������¹�ŧ�س����� ���������͹��������������ҹ�ѡ����������������������� denaturing annealing ��� extension �������ǧ 15 �Թҷ� �֧ 10 �ҷ� �ѧ��������������ҳ����������Ը� PCR 25-40 �ͺ ������������ҳ 1.5-5 �������

���������������Ե��������ҡ��ԡ����� PCR

�����������Դ�ҡ��ԡ����� PCR ���ʹ��ͧ���������ö�ͧ��������������� �ѧ���������Ǩ�������������Ե����ͧ��������ҧ����� PCR ���¡�������������෤�Ԥ������¡��� agarose gel electrophoresis ���������¡��������������������������� (Agarose gel) �������ҧ��������������ö����͹���������������Ѻ��Ҵ�ͧ������������������������ �����������¡���Ը��������ö�ͧ������������������������� ��������ͧ�ʧ������͡Ѻ�ʧ�ص��������ŵ ��������ᶺ����������ͧ�ʧ������� (�Ҿ��� 4)
�Ҿ��� 4 ᶺ�����������¡����������Ը� agarose gel electrophoresis
������������� ethidium bromide �����Ҿ������ʧ ultraviolet

����ª���ͧ PCR ������Ǩ�ԹԨ����ä

�Ѩ�غѹ����Ѻ����� PCR ��෤�Ԥ�Ӥѭ�ҡ��ҹͳ�������š�� ���������ҹ����ҹ���ͧ��Ժѵ��������֧�������ء�����ҧ���ᾷ���������ɵ�����ö�������ԹԨ����ä��ҧ � ����ä�Դ��������ä�ҡ�ѹ������ �֡�������ѹ�����������ѹ����ͧ�ѹ�����������չ ��Ἱ����չ����֡�����Ѻ���ͧ�չ�ͧ��������Ե���ء��Դ ���������ͧ���ҡ෤�Ԥ�������ö�����ӹǹ����������ʹ��֡�����������ҳ�ҡ������ѹ�Ǵ���� �����෤�Ԥ���������������ª���ͧ PCR �ҧ��ҹ���ᾷ�� ���� �����Ǩ�ԹԨ����ä�������Ǩ���������������Ấ��������������˵��ͧ�ä (�� �ä�ʹ��,�ѳ�ä,��������) �����Ǩ���չ�������� (�� ����������,�����������˭�) �������ª���ͧ PCR �ҧ���ᾷ�������������������ԹԨ����ä������ͧ�ѹ����ѡ��������ҧ������Է���Ҿ�ҡ�������ҧ��ҹ����ɵ� PCR �����ҷ�ҡ��ҹ��ҹ�����Ѻ��ا�ѹ����ת �����Ǩ�ͺ����ѹ����ת �����Ǩ�ԹԨ����ä����ѹ����ת��ҹ�ҹ�ä ����֡����������ѹ�������ҧ�ת�Ѻ�����ä�������֡���չ�Ѻ������ � �ͧ�ת��������ä �������ʴ��͡�ͧ�չ���������� ���෤�Ԥ PCR ���������������֧�ѹ�������ͧ�����ä�ת��� �ת����� ��ʹ����������������ͧ�ѹ�ӨѴ�ä�ת����Դ�ҡ������ Ấ������ �������� �����������˵��ä��� �������෤�Ԥ PCR ���١��������ص��ˡ����������§��� ����� �ص��ˡ������͡�������������Ѻ������� 4-5 ������ҹ�ҷ����� ����Ѩ�غѹ����ɵ�����������ʺ�ѭ���ҡ�ä�кҴ��������§��� ��������������Ե������͡�������������٭����������֧���� 1-2 ������ҹ�ҷ ���˵��ͧ�ä�кҴ��������� ��ǹ�˭��Դ�ҡ��������������ͧ��෤�Ԥ PCR ������Ǩ�ͺ ���������ö��ͧ�ѹ�������кҴ�ͧ�ä���ѹ��ǧ�� �͡�ҡ�������Ѵ���͡����ѹ�������������������������ѹ�������������û�ǹ�ѹ�ء��� (genetic diversity ���� Variation) �٧���������ö���Թ������������Ը�����Ѵ���͡���������Է���Ҿ ����١��ͧ�֧�дѺ �ѹ��������������ͺ������ҡ ��Ƿ.

Toplist

โพสต์ล่าสุด

แท็ก

ไทยแปลอังกฤษ แปลภาษาไทย โปรแกรม-แปล-ภาษา-อังกฤษ พร้อม-คำ-อ่าน lmyour แปลภาษา แปลภาษาอังกฤษเป็นไทย pantip ไทยแปลอังกฤษ ประโยค แอพแปลภาษาอาหรับเป็นไทย ห่อหมกฮวกไปฝากป้าmv ระเบียบกระทรวงการคลังว่าด้วยการจัดซื้อจัดจ้างและการบริหารพัสดุภาครัฐ พ.ศ. 2560 แปลภาษาอาหรับ-ไทย Terjemahan พจนานุกรมศัพท์ทหาร หยน แปลภาษา มาเลเซีย ไทย Bahasa Thailand ข้อสอบภาษาอังกฤษ พร้อมเฉลย pdf บบบย tor คือ จัดซื้อจัดจ้าง การ์ดแคปเตอร์ซากุระ ภาค 4 ชขภใ ยศทหารบก เรียงลําดับ ห่อหมกฮวกไปฝากป้า หนังเต็มเรื่อง เขียน อาหรับ แปลไทย แปลภาษาอิสลามเป็นไทย Google map กรมพัฒนาฝีมือแรงงาน อบรมออนไลน์ กระบวนการบริหารทรัพยากรมนุษย์ 8 ขั้นตอน ข้อสอบคณิตศาสตร์ พร้อมเฉลย ค้นหา ประวัติ นามสกุล อาจารย์ ตจต แจ้ง ประกาศ น้ำประปาไม่ไหล แปลบาลีเป็นไทย แปลภาษา ถ่ายรูป แปลภาษาจีน แปลภาษามลายู ยาวี โรงพยาบาลภมูพลอดุยเดช ที่อยู่ Google Drive Info TOR คือ กรมพัฒนาฝีมือแรงงาน ช่างไฟฟ้า กรมพัฒนาฝีมือแรงงาน อบรมฟรี 2566 กลยุทธ์ทางการตลาด มีอะไรบ้าง การบริหารทรัพยากรมนุษย์ มีอะไรบ้าง การประปาส่วนภูมิภาค การ์ดแคปเตอร์ซากุระ ภาค 3 ขขขขบบบยข ่ส ข่าว น้ำประปา วันนี้ ข้อสอบโอเน็ต ม.6 มีกี่ตอน ตารางธาตุ ประปาไม่ไหล วันนี้